體外細胞毒性試驗陽性對照品

體外細胞毒性試驗陽性對照品由Hatano Research institute  (HRI) 研究生產，廣泛應用于體外細胞毒性實驗，可以滿足中國藥典-細胞毒性檢查方法、ISO 10993和YBB 00012003細胞毒性檢查法的參數要求。

體外細胞毒性試驗陽性對照品使用常規培養基進行浸提。浸提方法如下：無菌操作，取1g體外細胞毒性試驗陽性對照品放置于15mL無菌離心管中，按照3mL/g浸提比例加入浸提介質培養基，水平放置振蕩，120rpm，37℃條件下浸提24h。浸提結束后上下顛倒混勻10次，取浸提液用于試驗。浸提所用的培養基作為空白對照。注意配制好的培養基在4℃條件下貯存不超過兩周。體外細胞毒性試驗采用MTT法進行檢測：取狀態良好的L929細胞，消化離心，配制成細胞懸液，接種于96孔培養板。每組設立多個復孔，每孔接種100µL細胞懸液，置37℃、5%二氧化碳的CO2培養箱培養24h。棄去原培養基，加入100µL浸提液、空白對照液，于CO2培養箱繼續培養。24h后，于顯微鏡下觀察細胞形態。棄去孔內液體，每孔加入50µL1mg/mL的無菌MTT溶液（MTT用MEM培養基配置，現用現配，不可用培養基配制），繼續培養2h后棄去孔內液體，加入100µL異丙醇，振蕩混勻，在570nm和650nm波長下測定吸光度，計算細胞存活率。

細胞毒性試驗是利用體外細胞培養的方法評價生物材料和醫療器械或浸提液潛在的細胞毒性，是生物材料生物學評價體系中重要的測定指標之一，也是幾乎各種用途的醫療器械和生物材料必須進行檢測的項目。細胞毒性試驗能在短期內測試生物材料對細胞代謝功能的影響，可以快速篩選材料是否具有潛在的細胞毒性。

細胞毒性試驗作為檢測生物材料毒性的手段，具有簡便、敏感性高、成本低、試驗周期短等優點，廣泛用于生物材料和醫療器械產品的生物相容性檢測和評價手段。對生物材料細胞毒性的評價方法從觀察細胞的形態和數量變化，發展到對細胞的粘附、增殖、代謝等方面的評價，以有活力的細胞數和細胞增殖能力作為評價生物材料細胞生物相容性的評價方法。具體的試驗有中性紅攝取試驗、克隆形成試驗、MTT細胞毒性試驗和XTT細胞毒性試驗等方法，其中以MTT和XTT細胞毒性試驗方法，由于可以定量測定材料的細胞毒性，因此更為被大家接受并且應用也更為廣泛。

MTT和XTT細胞毒性試驗檢測原理為活細胞線粒體中琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢(Formazan)并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)或異丙醇或吩嗪硫酸甲酯(PMS)能溶解細胞中的甲臢結晶，用酶標儀在570nm波長處測定其光吸收值，在一定細胞數范圍內，結晶形成的量與細胞數成正比。根據測得的吸光度值(OD值)，來判斷活細胞數量，OD值越大，細胞活性越強，毒性越小。通過計算細胞的增殖率，可以定量分級評價醫用材料及其制品的細胞毒性。也可以通過浸提液的不同濃度稀釋情況下細胞的存活度計算IC50(細胞活度抑制50％的濃度)，評價生物材料及其制品的細胞毒性。

體外細胞毒性試驗陽性對照品具有批次重現性好，性能穩定、規格大小豐富的特點，可以作為醫療器械生物學評價-細胞毒性測定的理想材料。